Иммунологические методы исследования в лабораторной практике

врачу

Лабораторное исследование, направленное на определение количества антител трех видов (IgG, IgA, IgM) с целью оценки потенциала гуморального иммунного ответа, не связанного со специфичностью антигенов. Анализ назначается при комплексном иммунологическом обследовании. Результаты находят применение в иммунологии, инфекционистике, онкологии и хирургии. Показаниями могут служить иммунодефицитные состояния различного происхождения, длительные и рецидивирующие инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания и послеоперационные осложнения. Уровень иммуноглобулинов определяется в венозной крови.

Сдать анализ крови на иммуноглобулины, можно в любое удобное для вас время. Ознакомьтесь с графиком работы врачей, и выберите удобное для вас время. Контактные данные и схема проезда есть на странице контактов.

Уровень иммуноглобулинов суммарных IgG, IgA, IgM в крови отражает состояние гуморального иммунитета. Иммуноглобулины – гликопротеины, которые производятся B-лимфоцитами при инфекционном заражении или проникновении в организм химических соединений, которые распознаются как опасные. В организме человека выделяют 5 классов иммуноглобулинов, каждый из которых имеет свои особенности в строении и функциях. За формирование иммунного ответа при инфицировании отвечают иммуноглобулины IgG, IgA и IgM. Взаимодействуя с чужеродным агентом, антитела нейтрализуют его, усиливают лизис поврежденной клетки. Также в процессе этих реакций происходит «запоминание» антигена, при повторном инфицировании антитела вырабатываются быстрее.

Анализ на иммуноглобулины является комплексным исследованием, при интерпретации его результатов учитывается как каждый показатель в отдельности, так и общая концентрация антител. Иммуноглобулины G содержатся в жидких средах организма, составляют около 80% всех антител, при первичном инфицировании вырабатываются через 5 суток, способны «запоминать» антиген и более активно защищать организм при повторном заражении. Иммуноглобулины A находятся на слизистых оболочках, защищают дыхательные и мочеполовые пути, желудочно-кишечный тракт. Они препятствуют проникновению антигенов вглубь тканей. Иммуноглобулины M циркулируют в крови и лимфатической жидкости, вырабатываются сразу после проникновения инфекции в организм и запускают иммунный ответ.

Низкий уровень иммуноглобулинов определяется при недостаточной активности иммунной системы. Высокие показатели могут быть признаком гематологических заболеваний, системных патологий. Для проведения анализа кровь берется из вены.

Подробное описание исследования

Сывороточное железо — это микроэлемент, который не вырабатывается в организме человека самостоятельно, а поступает только извне с пищей.

Железо входит в состав:

  1. Гемоглобина, который является главным переносчиком кислорода легких к тканям и органам;
  2. Миоглобина, который находится в мышцах и отвечает за создание кислородного резерва.

Также железо участвует в клеточном обмене, в работе иммунной системы, входит в состав некоторых ферментов, обеспечивая нормальное протекание в них метаболических реакций, а также участвует в синтезе ДНК.

Всего в организме находится не более 5г железа. Оно поступает с пищей из животных и растительных источников. Это так называемое гемовое (содержится в мясных продуктах, в составе гемоглобина) и негемовое (ферменты и белки растительной пищи) железо. Из общего количества железа, которое поступило в организм, всасывается всего около 10%. Процесс всасывания происходит в двенадцатиперстной кишке.

В плазме крови человека большая часть железа находится в окисленном трехвалентном состоянии в связке с белком трансферрином. Трансферрин переносит железо к тканям и органам. Большая часть поступающего железа уходит на образование гемоглобина, а оставшаяся часть депонируется (запасается). Основное депо железа в организме — это специальные белковые комплексы «ферритин» и «гемосидерин». Отсюда железо расходуется в случае его снижения в сыворотке крови. Восстановление железа сыворотки крови зависит от степени наполнения депо. При длительной нехватке железа его запасы истощаются, что может привести к анемии. Данный механизм регуляции обеспечивает самосохранение.

Концентрация сывороточного железа — важный биохимический показатель, изменение которого может указывать на возможные проблемы обмена этого микроэлемента.

Дефицит железа встречается чаще, чем его переизбыток. Как правило, человек не замечает, что у него развивается анемия — патологическое снижение концентрации гемоглобина крови. Обычно это становится заметно, когда концентрация гемоглобина становится ниже 100 г/л. Тогда человек может жаловаться на повышенную утомляемость, головокружение, выпадение волос, бледность кожи и ломкость ногтей. В некоторых случаях люди отмечают ощущение покалывания и жжения кончика языка.

Если не предпринимать никаких действий, направленных на восстановление депо железа, дальше развивается одышка, рассеянность внимания, учащенное сердцебиение (тахикардия).

Подобные состояния наблюдаются при онкологических заболеваниях (особенно если поражен кишечник), железодефицитных анемиях, желтухе, острых и хронических инфекциях, язвенной болезни и язвенном колите. Дефицит железа часто может быть вызван хронической кровопотерей при геморрое. При целиакии, болезни Крона и в послеоперационном периоде также диагностируют анемию. Концентрация железа у женщин изменяется в зависимости от фазы менструального цикла.

Также встречается так называемая «анемия беременных» — состояние при котором снижается концентрация сывороточного железа у беременных женщин. Как правило, во втором триместре, когда формируется депо железа у плода. Это состояние также требует особого наблюдения.

Переизбыток железа встречается реже и характеризуется следующими симптомами: боли в животе и суставах, нарушение сердечного ритма, а также, схожая с анемией, усталость.

Для нормальной работы всех органов и систем необходимо, чтобы с пищей в день поступало не менее 1 мг железа. Продукты питания богатые этим микроэлементом: мясо и субпродукты (свиная печень), бобовые (чечевица, фасоль), зелень (шпинат, сельдерей), фрукты (гранат, яблоки). Аскорбиновая кислота улучшает процесс всасывания железа, поэтому рекомендуется употреблять ее вместе с железосодержащими продуктами. Помешать усвоению железа могут молочные продукты и кофеин.

Нормальные значения

Иммуноглобулины G проникают через плаценту к плоду, поэтому их уровень у новорожденных высок, а в течение первого года снижается, так как происходит замена материнских иммуноглобулинов собственными. Границы нормы зависят от возраста и пола пациента.

  • на первом месяце жизни – 3,97-17,65 г/л для мальчиков, 3,91-17,37 г/л для девочек
  • с 1 месяца до года – 2,05-9,48 г/л для мальчиков, 2,03-9,34 г/л для девочек
  • с года до 2 лет – 4,75-12,10 г/л для мальчиков, 4,83-12,26 г/л для девочек
  • с 2 до 80 лет – 5,40-18,22 г/л для мальчиков и мужчин, 5,52-16,31 г/л для девочек и женщин

Иммуноглобулины A неспособны преодолевать плацентарный барьер, у новорожденных их концентрация в крови очень низкая. Собственный синтез антител полностью налаживается к 5 годам. Значения нормы для иммуноглобулина A составляют:

  • в первые 3 месяца жизни – 0,01-0,34 г/л
  • с 3 месяцев до года – 0,08-0,91 г/л
  • с года до 12 лет – 0,21-2,91 г/л для мальчиков, 0,21-2,82 г/л для девочек
  • с 12 до 60 лет – 0,63-4,84 г/л для мальчиков и мужчин, 0,65-4,21 г/л для девочек и женщин
  • после 60 лет – 1,01-6,45г/л для мужчин, 0,69-5,17 г/л для женщин

Иммуноглобулины M имеют большую молекулярную массу и не проникают через плаценту при беременности. У детей концентрация антител увеличивается постепенно, к 7-12 годам достигает значений взрослых:

  • в первые 3 месяца жизни – 0,06-0,21 гл
  • с 3 месяцев до года – 0,17-1,43 г/л для мальчиков, 0,17-1,50 г/л для девочек
  • с года до 12 лет – 0,41-1,83 г/л для мальчиков, 0,47-2,40 г/л для девочек
  • после 12 лет – 0,22-2,40 г/л для мальчиков и мужчин, 0,33-2,93 г/л для девочек и женщин

Физиологическое снижение уровня иммуноглобулинов может быть выявлено при беременности, повышение – при интенсивных физических нагрузках, переживании сильных эмоций.

Повышение уровня

Иммуноглобулины являются маркерами инфекционного процесса в организме, самая распространенная причина повышения их уровня в крови – респираторные и желудочно-кишечные инфекции. Увеличение концентрации антител IgG и IgA характерно для хронических процессов, количество антител IgM возрастает как при острых, так и при хронических формах заболеваний. К другим причинам повышения уровня иммуноглобулинов относятся аутоиммунные патологии, поражения печени, а также миеломная болезнь и другие моноклональные гаммапатии.

Снижение уровня

Чаще всего причиной понижения уровня иммуноглобулинов является приобретенная недостаточность. Концентрация антител уменьшается при нарушении их производства – при новообразованиях лимфатической системы, лимфопролиферативных заболеваниях. Кроме этого, уровень иммуноглобулинов снижается при их усиленном распаде и быстром выведении белка – при облучении, применении лекарств (например, цитостатиков), энтеропатиях, нефропатиях и ожогах. Реже причиной снижения уровня иммуноглобулинов становится врожденная недостаточность. Она развивается при агаммаглобулинемии врожденной, атаксии-телеангиэктазии (IgA), синдроме Вискотта-Олдрича (IgG) и селективной IgM-недостаточности.

полный список статей

Использованная литература

  1. Федеральные клинические рекомендации по диагностике и лечению железодефицитной анемии, 2015. — 58 с.
  2. Клочкова-Абельянц, С.А., Суржикова, Г.С. Железодефицитная анемия и анемия хронических заболеваний: некоторые аспекты патогенеза и перспективы дифференциальной диагностики. — Медицина в Кузбассе, 2021. — №3. — С.25-28.
  3. Tiglis, M., Neagu, T., Niculae, A. et al. Incidence of Iron Deficiency and the Role of Intravenous Iron Use in Perioperative Period, 2021. — Vol. 56(10). — P. 528.

Значение контроля качества образцов

Контроль качества (КК) биообразцов, применяемых для научных исследований, имеет принципиально важное значение для обеспечения достоверности получаемых данных. Однородность процедур сбора, транспортировки и условий хранения биообразцов имеет решающее значение для обеспечения качества многоцентровых научных исследований.

Важным и эффективным инструментом для такой стандартизации и сохранения большого количества биологических образцов является создание биобанка. Биобанк — структура для сбора, хранения и поставки биологических образцов и связанных с ними данных, которая следует стандартным операционным процедурам и предоставляет материалы для научного использования [2].

Все биообразцы подвергаются процедурам сбора, транспортировки, пробоподготовки и хранения. Процедуры в биобанке выполняются строго по принятым стандартам, в противном случае может снизиться качество биообразцов. Забор биоматериала осуществляется медицинским персоналом по стандартной методике в соответствии с п. 3.2 ГОСТ 53079.4 — 2008 [3]. Далее биоматериал вместе с необходимыми документами транспортируется в биобанк, где осуществляется пробоподготовка и регистрация полученного биоматериала (рис. 1).

Рис. 1. «Жизненный цикл» биообразцов.


Таблица 1. Диагностические инструменты КК


Таблица 2. Пригодность биологического материала для исследований в различных областях

Пробоподготовка крови включает центрифугирование и дальнейшее аликвотирование сыворотки или плазмы крови. В соответствии со стандартом необходимо выполнить центрифугирование крови не позднее, чем через 1 ч после забора. Затем аликвотированный биоматериал помещается на хранение в морозильные камеры при температуре –80 °С.

Процедуры КК предназначены для оценки данных и биообразцов, используемых в научных исследованиях. КК данных включает контроль демографической, клинической информации, точность обработки данных, в то время как КК биологических образцов включает анализы на подлинность, целостность и идентичность образцов [1]. КК биологических образцов необходим для обеспечения точной характеристики и категоризации образцов, а также для избежания ошибок в последующих исследованиях из-за внутренней неоднородности в образцах.

Процедуры КК могут осуществляться биобанком, конечным пользователем или лабораторией субподрядчиков и должны выполняться с соблюдением правил GLP (Good Laboratory Practice, Надлежащая лабораторная практика) или стандартов ISO 15189:2012 (Медицинские лаборатории — особые требования к качеству и компетентности), ISO 17025:2005 или CLIA (Clinical laboratory improvement amendments, Поправки к клиническим лабораторным улучшениям) [4—6].

Ретроспективный КК может быть применен либо к случайно выбранным образцам, либо к образцам, качество которых вызывает наибольшее сомнение. Первый подход позволяет сравнивать различные места сбора, а второй позволяет целенаправленно оценивать образцы с «наибольшим риском» [2].

Пригодность биологического материала для исследований в различных областях

Сыворотка крови

Гемолиз.

Можно проверить наличие Hb-загрязнения и убедиться, что образец пригоден для протеомного анализа или анализа на основе микроРНК с помощью ELISA или спектрофотометрии. Если концентрация Hb выше 50 мг/л, произошел гемолиз, проба считается загрязненной Hb [9].

Воспаление.

Проверить наличие маркера воспаления в образце можно, измерив концентрацию С-реактивного белка (СРБ) с помощью ИФА или нефелометрии. Если концентрация выше 10 мг/л, образец показывает наличие воспаления [9].

Пригодность для исследования сердечно-сосудистых заболеваний.

Для установления пригодности для исследований необходимо измерить:

а) уровень BNP, NT-proBNP, используя ИФА;

б) уровень ANFPTL3, используя ИФА или электрохемилюминесцентный иммуноанализ;

в) уровень СК-MB и ET-1, используя ИФА;

г) ММР-3 и уровень ММР-9 с использованием ИФА;

д) уровень тропонина I и тропонина Т с использованием ИФА или электрохемилюминесцентного иммуноанализа.

Эти белки должны выявляться, чтобы образец можно было использовать в исследованиях сердечно-сосудистых заболеваний [9].

Пригодность для исследования заболеваний печени.

Необходимо измерить уровни аланинаминотрансферазы (АЛТ) с помощью флюороиммуноанализа. АЛТ должен быть обнаружим, чтобы проба подходила для исследования заболеваний печени [9].

Пригодность
сцелью исследования аутоиммунитета.
Для исследований необходимо определить уровень фактора некроза опухоли-α (TNF-α) с помощью чувствительного ИФА. TNF-α должен быть обнаружим, чтобы образец соответствовал критериям исследования аутоиммунитета [9].

Пригодность для исследований
вобласти эндокринологииидиабета.
Необходимо измерить уровень пептида инсулина C и инсулина как предшественника фактора роста II с помощью ИФА, флюороимуноанализа или радиоиммуноанализа; уровень альдостерона и соматомедина С с помощью ИФА. Эти белки должны быть обнаружены, чтобы образец соответствовал исследованиям в области эндокринологии [9].

Пригодность для исследования воспаления
ииммунологии.
Необходимо измерить уровень комплемента C с помощью нефолометрии или энзиматического иммуноанализа; уровень ICAM-1и TNF-α с помощью энзиматического иммуноанализа. Эти белки должны быть обнаружены, чтобы образец соответствовал исследованиям в области воспаления и иммунологии [9].

Пригодность
сцелью исследованиявонкологии.
Для проверки необходимо: использовать ИФА M65 EpiDeath; измерить уровень VCAM-1 с помощью ИФА. Эти белки должны обнаруживаться, чтобы образец соответствовал исследованиям в области онкологии [9].

Пригодность для целей исследований
вобласти заболеваний опорно-двигательного аппарата.
Необходимо измерить уровень MID-остеокальцина, остеокальцина и кальцитонина, а также С-терминального телопептида и коллагена типа 1, интактного паратиреоидного гормона (ПТГ) с помощью ИФА или электрохемилюминесцентного иммуноанализа. Эти белки должны быть обнаружены для того, чтобы образец мог быть использован в исследованиях в области заболеваний опорно-двигательного аппарата [9].

Пригодность для исследования
вобласти питания.
Необходимо измерить уровень витамина B12 с помощью электрохемилюминесцентного иммуноанализа. Витамин B12 должен быть обнаружим, чтобы образец соответствовал критериям исследования питания [9].

Пригодность для исследования нейродегенеративных заболеваний.

Для установления пригодности для подобных исследований необходимо измерить уровень амилоида Aβ42 с помощью ИФА; нейрон-специфический уровень энолазы с помощью иммуноанализа Kryptor, ИФА или электрохемилюминесцентного иммуноанализа. Эти белки должны обнаруживаться, чтобы образец соответствовал исследованиям нейродегенеративных заболеваний [9].

Плазма крови (ЭДТА
и
цитратная)

Контаминация тромбоцитами.

Проверить наличие тромбоцитов и убедиться, что образец пригоден для анализа на микрочастицы или ccfRNA, можно, выполнив подсчет клеток. Если концентрация тромбоцитов ниже 104/мл, считается, что отсутствует значимая контаминация образца плазмы тромбоцитами [9].

Активация тромбоцитов.

Также можно проверить активацию тромбоцитов и убедиться, что образец пригоден для исследования биомаркеров, на которые влияет активация тромбоцитов путем измерения концентрации β-тромбоглобулина (βTG) с помощью ELISA. Если концентрация выше 200 нг/мл, происходит активация тромбоцитов [9].

Гемолиз.

Проверить наличие загрязнения Hb и убедиться, что образец пригоден для протеомного анализа или анализа микроРНК, можно, выполнив ELISA или спектрофотометрию. Если концентрация Hb выше 20 мг/л, произошел гемолиз и проба считается загрязненной Hb [9].

Воспаление.

Проверить выраженность воспаления в образце можно, измерив концентрацию СРБ с помощью ИФА или нефелометрии. Концентрация выше 10 мг/л свидетельствует о воспалении [9].

Пригодность для исследования сердечно-сосудистых заболеваний.

Для установления пригодности для исследований необходимо измерить уровень тропонина I и тропонина Т, используя ИФА или электрохемилюминесцентный иммуноанализ; уровень вазоактивного интестинального пептида (VIP), используя ИФА.

Эти белки должны быть обнаружены, чтобы образец соответствовал исследованиям сердечно-сосудистых заболеваний [9].

Пригодность для исследования липидного обмена.

Для проверки можно измерить уровни активности белка-переносчика CETР с помощью флюороиммуноанализа. CETP должен быть обнаружим, чтобы проба соответствовала требованиям для исследования липидного обмена/липидомного анализа [9].

Пригодность для исследования аутоиммунитета.

Для данного исследования можно измерить TNF-α с помощью чувствительного ИФА. TNF-α должен быть обнаружим, чтобы образец соответствовал критериям исследования аутоиммунитета [9].

Пригодность для целей исследований
вобласти эндокринологии, включая диабет.
Для оценки пригодности можно измерить уровень глюкагоноподобного пептида 1, используя ИФА или радиоиммуноанализ; уровень аденокортикотропного гормона, используя электрохемилюминесцентный иммуноанализ или радиоиммуноанализ; уровень альдостерона и соматомедина С, используя ИФА.

Эти белки должны быть обнаружены, чтобы образец соответствовал исследованиям в области эндокринологии, включая сахарный диабет [9].

Пригодность для исследования воспаления
ииммунологии.
Для проверки можно измерить: уровни комплемента С с помощью нефолометрии или энзиматического иммуноанализа; уровень ICAM-1 с помощью энзиматического иммуноанализа. Эти белки должны быть обнаружены, чтобы образец соответствовал исследованиям воспаления и иммунологии [9].

Пригодность для целей исследований заболеваний опорно-двигательного аппарата.

Необходимо измерить уровень C-терминального телопептида и коллагена I типа, используя ИФА или электрохемилюминесцентный иммуноанализ. Эти белки должны обнаруживаться, чтобы образец мог быть использован для исследований в области заболеваний опорно-двигательного аппарата [9].

Пригодность для исследования нейродегенеративных заболеваний.

Для установления пригодности для исследований можно измерить уровень амилоида Aβ42 с помощью ИФА. Aβ42 должен быть детектируемым, чтобы проба подходила для исследования нейродегенеративных заболеваний [9].

Пригодность для исследования коагуляции

(только для цитратной плазмы). Для проверки можно измерить уровень антифактора Ха и фибриногена; фрагменты протромбина 1 и 2 и активность ингибитора активатора плазминогена типа 1 или антиген с использованием ИФА; анализ образования тромбина с использованием флюороиммуноанализа; антиген ТРА с использованием ИФА. Эти белки должны обнаруживаться, чтобы образец соответствовал необходимому качеству для изучения процесса коагуляции [9].

Рейтинг
( 1 оценка, среднее 5 из 5 )
Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Для любых предложений по сайту: [email protected]