Повышение агрегации – маркер гиперагреационного синдрома и тромбофилий. Наиболее часто используются турбидиметрический метод Борна, основанный на регистрации изменений светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы и метод исследования агрегации тромбоцитов, основанный на анализе флуктуаций светопропускания, вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале.
Материал для исследования.
Цитратная богатая тромбоцитами плазма
Метод исследования
определяется порядком работы на том или ином типе агрегометра.
В качестве индукторов наиболее часто используют растворы АДФ, ристоцетина, коллагена, адреналина, арахидоновой кислоты. Также могут использоваться растворы тромбина, серотонина и др.
Агрегация тромбоцитов с АДФ
Воздействие малых доз АДФ (обычно 1*10-7 моль) приводит к формированию двойной волны агрегации. Первая фаза (первичная волна) зависит от добавленного экзогенного АДФ, а вторая фаза (вторичная волна агрегации) возникает за счет реакции высвобождения собственных агонистов, содержащихся в гранулах тромбоцитов. Большие дозы АДФ (обычно 1*10-5 моль) приводят к слиянию первой и второй волн агрегации.
При анализе агрегатограмм обращают внимание на общий характер агрегации (одноволновая, двухволновая; полная, неполная; обратимая, необратимая) и скорость агрегации. Появление двухволновой агрегации при стимуляции АДФ в концентрациях, вызывающих в норме обратимую агрегацию (обычно 1-5 мкмоль), указывает на повышение чувствительности тромбоцитов, а развитие одноволновой неполной (а часто и обратимой) агрегации при стимуляции АДФ в концентрациях 10 мкмоль и больше – на нарушение реакции высвобождения тромбоцитов.
Агрегация тромбоцитов с ристоцетином
Определение агрегации тромбоцитов с ристоцетином в плазме применяют для количественной оценки фактора Виллебранда. В основе метода лежит способность ристоцетина стимулировать in vitro взаимодействие фактора Виллебранда с тромбоцитарным гликопротеидом Ib. В большинстве случаев болезни Виллебранда отмечается нарушение ристоцетин-агрегации при нормальном ответе на воздействие АДФ, коллагена и адреналина. Нарушение ристоцетин-агрегации выявляют и при болезни Бернара-Сулье. Для дифференциации применяют тест с добавлением нормальной плазмы: при болезни Виллебранда после добавления нормальной плазмы ристоцетин-агрегация нормализуется, в то время как при синдроме Бернара-Сулье этого не происходит. Индуцированная ристоцетином агглютинация тромбоцитов снижена при большинстве случаев болезни Виллебранда, кроме типа IIВ.
Использованная литература
- Клиническая лабораторная диагностика, Национальное руководство, Том 1, Долгов В.В., Меньшиков В.В., 2012, стр 761-765
- Козловский В. И., Ковтун О. М., Сероухова О. П., Детковская И. Н., Козловский И. В. Методы исследования и клиническое значение агрегации тромбоцитов. Фокус на спонтанную агрегацию // Вестник ВГМУ. 2013. №4.
- Puri RN, Colman RW.ADP-induced platelet activation.Crit Rev BiochemMol Biol. 1997;32(6):437-502. doi: 10.3109/10409239709082000. PMID: 9444477.
- «Клинико-лабораторная диагностика нарушений функции тромбоцитов». Васильев С.А., Берковский А.Л., Мелкумян А.Л., Суворов А.В., Мазуров А.В., Козлов А.А. ФГБУ Гематологический научный центр, МЗ РФ, Москва, 2013 г.
Агрегация тромбоцитов с коллагеном
Агрегация тромбоцитов с коллагеном имеет достаточно выраженную латентную фазу, во время которой происходит активация фосфолипазы С. В зависимости от концентрации используемого реагента продолжительность этой фазы может составлять 5-7 минут. После завершения этого периода в тромбоцитах происходят процессы, приводящие к образованию вторичных посредников, вследствие чего развивается секреция тромбоцитарных гранул и синтез тромбоксана А2, что сопровождается резким усилением межтромбоцитарного взаимодействия.
В лабораторно-клинической практике коллаген чаще всего используют в конечной концентрации 50 мкг/мл, однако коллагены разных фирм могут обладать различной активностью, что необходимо учитывать при их применении.
Что такое тромбоциты?
Эти элементы образуются в костном мозге и представляют собой мелкие округлые пластинки неправильной формы, в которых отсутствуют ядра. Функция этих частиц очень важна: они задействованы в процессе свертывания крови и регенерации поврежденной ткани, то есть способствуют предотвращению больших кровопотерь в случае повреждения сосудов. Живут клетки не более 10 дней, после чего разрушаются в селезенке и печени, а их замещают новые.
В течение дня число тромбоцитов меняется. Они повышены при физических нагрузках. Во время беременности и при менструации их количество, наоборот, уменьшается. Такие изменения считаются естественными, и уровень тромбоцитов нормализуется в состоянии покоя, по окончании месячных или после родов.
В остальных случаях отступления от нормы в любую сторону говорят о какой-либо патологии. Состояние, при котором тромбоциты повышены, называют тромбоцитозом, а если понижены, то – тромбоцитопенией.
Агрегация тромбоцитов с адреналином
Адреналин при контакте с тромбоцитами взаимодействует с α2-адренорецепторами, что вызывает ингибирование аденилатциклазы. Не исключено, что механизм, лежащий в основе реализации эффекта адреналина и развития первой волны агрегации, не зависит от образования тромбоксана А2, реакции высвобождения или синтеза фактора агрегации тромбоцитов, а связан со способностью адреналина прямо изменять проницаемость клеточной мембраны для ионов кальция. Вторая волна агрегация возникает как результат реакции высвобождения и продукции тромбоксана А2.
Анализ на PLT у детей
Контроль состава крови, в том числе и уровня PLT, особенно важен в детском возрасте. Если этот показатель опустился ниже нормы, можно предположить наличие следующих заболеваний:
- аллергические реакции на лекарства;
- интоксикации;
- тиреотоксикоз;
- заболевания крови;
- паразитарные и вирусные инфекции.
Причины повышенного уровня PLT у детей разнообразны. Выделяют первичный тромбоцитоз и вторичный. Первый обусловлен тем, что стволовые клетки головного мозга производят избыточное количество тромбоцитов с измененной структурой, что, например, наблюдается при лейкозе.
Вторичный, или реактивный, развивается в результате какого-либо патологического процесса, который и нарушает выработку этих клеток, а также их строение и форму. К факторам развития реактивного тромбоцитоза можно отнести:
- тяжелые операции;
- удаление селезенки;
- внезапно начавшееся кровотечение;
- остеомиелит;
- анемии;
- переломы костей трубчатых;
- легочные инфекции;
- злокачественные болезни;
- некоторые препараты.
Видео о функциях тромбоцитов и о причинах изменения их количества в крови:
Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой
Арахидоновая кислота – природный агонист агрегации, причем ее действие опосредовано эффектами простагландинов G2 и H2, тромбоксана А2, и включает активацию как фосфолипазы C с последующим образованием вторичных посредников, мобилизацией внутриклеточного кальция и расширением процесса активации клеток, так и фосфолипазы А2, что непосредственно приводит к освобождению эндогенной арахидоновой кислоты. Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой происходит достаточно быстро, поэтому кривая, характеризующая этот процесс, чаще носит одноволновый характер.
Для индукции агрегации кровяных пластинок арахидоновую кислоту используют в концентрациях 10-3-10-4моль. При работе с арахидоновой кислотой следует учитывать, что на воздухе это вещество очень быстро окисляется.
Пробу на агрегацию с арахидоновой кислотой рекомендуют проводить в случаях использования лекарственных средств, влияющих на реакцию агрегации (например, ацетилсалициловая кислота, пенициллин, индометацин, делагил, диуретики), что нужно учитывать при оценке результатов исследований.
Агрегация тромбоцитов
Для оценки функции тромбоцитов в ООО «Лаборатории ЦИР» проводится анализ на индуцированную агрегацию тромбоцитов. Это анализ высокого качества, выполняется на автоматическом агрегометре.
Для оценки функции тромбоцитов в Лаборатории ЦИР проводится анализ на индуцированную агрегацию тромбоцитов. Это анализ высокого качества, выполняется на автоматическом агрегометре. Так как этот анализ резко меняется при приеме препаратов, влияющих на свертывание крови (антиагреганты, например, аспирин, тромбо-асс, антикоагулянты, например, гепарин), желательно сдавать его до начала приема этих лекарств. По каждой агрегатограмме врач-лаборант выдает заключение.
Анализ на агрегацию тромбоцитов рекомендуется в следующих случаях: при невынашивании беременности, неудачных попытках ЭКО, тяжелых осложнениях беременности в анамнезе, бесплодии неясного генеза, а также при повышенной кровоточивости: легкое образование синяков, меноррагии, носовые кровотечения.
В кривой агрегации оцениваются амплитуда агрегации, форма кривой, наличие одной или двух волн, а также наличие дезагрегации.
На приведенном образце обозначены: 1- обнуление прибора, 2 — до добавления индуктора, 3 — пик, связанный с разведением пробы индуктором, 4 — начало отсчета, первая волна, 5 — вторая волна, 6 — дезагрегация.
Важная информация: сочетание приема пищевых продуктов, фитопрепаратов и пищевых добавок, содержащих компоненты из данного списка, с приемом антиагрегантов (тромбоАСС) и антикоагулянтов (гепарин) является опасной по риску кровотечения комбинацией (категория D по классификации FDA). Риск кровотечения в большинстве случаев превышает потенциальную пользу.
Подробнее В ЗАО «Лаборатории ЦИР» выполняется агрегация тромбоцитов со следующими индукторами:
- Агрегация с АДФ
- Агрегация с арахидоновой кислотой
- Агрегация с адреналином (эпинефрином)
- Агрегация с ристоцетином. Три первых индуктора позволяют оценить функцию тромбоцитов разных сторон, они дополняют друг друга. Агрегация с ристоцетином позволяет заподозрить опасное по кровотечениям состояние – болезнь Виллебранда (дефицит фактора фон Виллебранда). При планировании беременности этот анализ важен для исключения риска кровотечения в родах.
Агрегация с АДФ (синяя линия) и арахидоновой кислотой.
Агрегационный ответ резко снижен. Дезагрегация практически отсутствует.
Агрегация с АДФ.
Агрегационный ответ снижен. Дезагрегация практически отсутствует.
Агрегация тромбоцитов при приеме НПВС
(максимальное влияние оказывает аспирин)
Агрегация с арахидоновой кислотой. Агрегационный ответ отсутствует. Частая ситуация при приеме нестероидных противовоспалительных препаратов
Также при этом может снижаться агрегация тромбоцитов с АДФ и адреналином.
Агрегация с АДФ, ответ снижен. Частичная дезагрегация.
Агрегация с ристоцетином, агрегационный ответ резко снижен.
Анализ сдается в Марьино в будние дни и в субботу с 9.00 до 11.00, на Третьяковской и Войковской в будние дни с 8.00 до 10.00.
Какие лекарства влияют на агрегацию тромбоцитов
| Патогенетический механизм | Путь реализации воздействия | Препараты |
| Ингибиторы образования тромбоксана А2 | ||
| Ингибиторы фосфолипаз | Препятствуют образованию арахидоновой кислоты, ингибируют коллаген-, АДФ- и адреналин-агрегацию | Хинакарпин, большие дозы кортикостероидов |
| Ингибиторы ЦОГ | Ацителируют мембраны тромбоцитов и ЦОГ, блокируют образование простациклина в эндотелии, ингибируя агрегацию и реакции высвобождения. На фоне лекарств, блокирующих ЦОГ, резко снижена на арахидоновую кислоту. | ПВП (аспирин, индометацин, бутадион, ибупрофен, сульпиразон), индоцид, фенопрофен |
| Ингибиторы тромбоксан-синтетазы | Блокируют синтез тромбоксана А2 не влияя на синтез простациклина. Ингибируют агрегацию под влиянием арахидоновой кислоты | Простациклин и его синтетические аналоги, имидазол и его дериваты (чувствительность индивидуальная) |
| Конкурентные антагонисты тромбоксана А2 | Блокируют рецепторы тромбоксана и подавляют агрегацию. Ингибируют агрегацию под влиянием арахидоновой кислоты | 1,3-азопростаноикоевая кислота и ее производные |
| Препараты, повышающие уровень цАМФ в тромбоцитах | ||
| Стимуляторы аденилатциклазы | Блокируют синтез тромбоксана A2, не влияя на синтез простациклина. Ингибируют агрегацию под влиянием арахидоновой кислоты. | Простациклин, ПГЕ,, дитерпен фосколин |
| Ингибиторы фосфодиэстеразы | Предотвращают деградацию цАМФ. Ингибируют адгезию тромбоцитов к субэндотелию, вторую волну агрегации, нарушают реакцию высвобождения | Дипиридамол, папаверин, эуфиллин, интенсаин |
| Стимуляторы синтеза простациклина | Усиливают синтез простациклина, его высвобождение из эндотелия, ослабляют его деградацию | Анаболические стероиды, никотиновая кислота, вазопрессин |
| Препараты, нарушающие транспорт кальция | ||
| Подавляют вторую волну агрегации | Изоптин, нифедипин | |
| Нарушают адгезивноагрегационную функцию тромбоцитов | Фуросемид в больших концентрациях | |
| Нарушают начальную и вторую волну АДФ-коллаген- и адреналин-агрегации тромбоцитов | Нитрофурантоин, аминазин, имипрамин, амитриптилин, антигистаминные, а- и ß-адреноблокаторы, высокие (свыше 20 млн ЕД/сут) дозы пенициллина, карбенициллин | |
| Препараты разных групп | ||
| Антикоагулянты | В высоких концентрациях снижают агрегацию | Пелентан, варфарин |
| Декстраны | Снижают агрегацию тромбоцитов | Реополиглюкин |
| Средства для наркоза | Снижают АДФ-агрегацию | Закись азота, циклопропан, фенобарбитал |
| Алкоголь | Снижает коллаген- и АДФ-агрегацию | |
| Антиагреганты | Снижают все виды агрегации, значительно усиливают эффект простациклина, нарушают связь между тромбоцитами и фибриногеном | Тиклид |
Презентация «Агрегация тромбоцитов»
- что такое агрегация тромбоцитов
- что такое гранулы тромбоцитов и что в них содержится
- какие есть активаторы тромбоцитов в живом организме и что использует лаборатория
- требования к проведению исследованию
- факторы, влияющие на агрегацию тромбоцитов
- интерпретация агрегатограмм
Оценка агрегации тромбоцитов и планирование беременности Что Вы принимаете? Влияние лекарств на агрегацию тромбоцитов Применение четырех индукторов при анализе агрегации тромбоцитов, АФС, полиморфизм генов Снижение агрегации, полиморфизм генов гемостаза, коагулограмма Зачем сдавать агрегацию тромбоцитов перед беременностью? Стоимость агрегации
Теги:
Агрегация, АДФ, тромбоциты, болезнь Виллебранда, аспирин
Назад в раздел
